吸光度原理
l 吸光度：當(dāng)入射光頻率與物質(zhì)分子的震動(dòng)頻率一致，或者入射光引起物質(zhì)分子電子能級(jí)躍遷，都會(huì)產(chǎn)生光學(xué)吸收現(xiàn)象。溶液的濃度越高，穿過(guò)溶液的分子也會(huì)相應(yīng)地被吸收越多。
l 其他：入射光透過(guò)物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生任何反應(yīng)或者變化，直接透過(guò)的光即為透射光。彈性散射的發(fā)生會(huì)引起光改變方向，但是不會(huì)引起波長(zhǎng)或者能量的變化，反之則為非彈性散射。
吸光度與透過(guò)率關(guān)系
l 測(cè)試樣品的透過(guò)率
l 透過(guò)率為透過(guò)光強(qiáng)度與原始光強(qiáng)的比值
如何根據(jù)您的應(yīng)用選擇不同的采樣附件是至關(guān)重要的。這其中就包括您需要考慮您的樣品是液體的還是氣體的；樣品的光學(xué)密度如何；是要原位測(cè)試，還是過(guò)程控制，或者是在一個(gè)反應(yīng)腔室內(nèi)。從應(yīng)用出發(fā)進(jìn)行附件篩選，海洋光學(xué)為您提供眾多附件選擇，從簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用（比如比色皿和比色皿支架）到復(fù)雜的采樣工具（比如透射探頭和流動(dòng)注射裝置等等）。
如何確定未知樣品的濃度
l Lambert-Beer定律是一個(gè)線性方程
l 使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)試其吸光度值
l 吸光度值和濃度之間可以建立一條線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線
l 最后通過(guò)測(cè)量未知樣品的吸光度值，從線性關(guān)系曲線中讀取該樣品的濃度值
吸光度測(cè)量
基于吸光度的簡(jiǎn)單實(shí)現(xiàn)與易使用，吸光度被廣泛運(yùn)用于液體和氣體的光譜測(cè)量技術(shù)中。吸光度光譜可以對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量鑒別或者對(duì)物質(zhì)進(jìn)行指紋認(rèn)證，亦或可以對(duì)溶液中的分子進(jìn)行濃度定量分析。
吸光度測(cè)量可以以多種形式呈現(xiàn)?；蜥槍?duì)液體或?qū)怏w，而且還可以將該應(yīng)用集成到工業(yè)應(yīng)用環(huán)境和客戶(hù)所關(guān)注的測(cè)試中。樣品不再僅僅使用比色皿作為載體，流動(dòng)池、浸入式探頭、微量進(jìn)樣器、氣體存儲(chǔ)皿、微量比色皿等等都可以作為采樣裝置。
使用模塊化光譜儀，我們可以針對(duì)特定的吸光度測(cè)量來(lái)選擇不同波長(zhǎng)范圍和分辨率的光譜儀，而且還能在實(shí)驗(yàn)室或者現(xiàn)場(chǎng)對(duì)整套光學(xué)測(cè)量裝置進(jìn)行快速、方便地更改。事實(shí)上，基于海洋光學(xué)強(qiáng)大的光譜儀、光源和采樣附件的產(chǎn)品線和靈活易用的搭配，可以針對(duì)不同的吸光度試驗(yàn)搭配出N中選擇。
吸光度測(cè)量的附件選擇
如何為您的吸光度測(cè)量選擇合適的采樣附件？以下提供一些參考：
測(cè)量使用環(huán)境與地點(diǎn)？更精確地說(shuō)，什么樣的附件能滿足您的現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室，并且方便易用？如果測(cè)試樣品能很簡(jiǎn)單地使用比色皿或者試管進(jìn)行測(cè)量，那選擇就可以擴(kuò)展到比色皿支架（圖1）或者其他支架類(lèi)產(chǎn)品。如果需要進(jìn)行實(shí)時(shí)的原位測(cè)量，或者流動(dòng)液體的測(cè)量，可以選擇透射形浸入式探頭（不同光程可選）（圖2）或者流動(dòng)池（圖3）等等。
l 樣品的性狀：液體還是氣體？由于氣體的特性，我們要么選擇高濃度樣品，要么選擇長(zhǎng)光程容器進(jìn)行測(cè)量。根據(jù)不同的樣品，10cm光程的容器一般都足夠了，比如CUV-UV-10（圖4），或者使用準(zhǔn)直透鏡直接接觸到樣品中進(jìn)行測(cè)試。
l 測(cè)試樣品的光學(xué)密度如何？光學(xué)密度OD值直接影響您對(duì)測(cè)試樣品不同光程容器的選擇。光學(xué)密度越高，所需要的光程就越短。比如，SpecVette™作為高濃度樣品的理想配件，它的光程可以短至250µm，另外還有1cm和10cm的標(biāo)準(zhǔn)配件可選。另外一方面，低OD的樣品需要長(zhǎng)光程配件，比如可以擴(kuò)展到500cm的長(zhǎng)光程流通池（圖3）就是比較好的選擇。如果您需要了解更多樣品濃度與光程之間的關(guān)系信息，請(qǐng)參考比爾-朗博定律的具體介紹。
l 樣品的體積如何？測(cè)量樣品的體積也影響采樣附件的選擇。針對(duì)低于2uL的微量樣品，可以選擇微量比色皿（圖5）和微量取樣器（圖6）
針對(duì)連續(xù)流動(dòng)的樣品怎么選擇？形流動(dòng)注射裝置（圖7），毛細(xì)管電泳池（圖8），還包括那些可以使用泵裝置/塑料套管連接的裝置（圖9）都是流動(dòng)樣品測(cè)量吸光度的選擇。
吸光度測(cè)量采樣附件選擇一覽表
類(lèi)型 | 可選 | 最佳應(yīng)用環(huán)境 |
比色皿 | 石英和塑料 | 實(shí)驗(yàn)室 |
比色皿支架
| 標(biāo)準(zhǔn)或者多用途； 恒溫控制； 可與光譜儀集成 | 實(shí)驗(yàn)室； 精確溫控實(shí)驗(yàn)； |
小體積，短光程采樣 | 5 µl 比色皿； 250 µm短光程附件 | 核酸和蛋白質(zhì)或者其他小體積樣品分析； 光學(xué)密度較高的樣品（比如墨水和染料）測(cè)試 |
流通池
| Z形流通池取樣分析； 小體積樣品池； | 微量液體的測(cè)試； 低濃度測(cè)試； 過(guò)程控制 |
浸入式探頭
| 苛刻的實(shí)驗(yàn)環(huán)境； 高溫、高壓環(huán)境 | 實(shí)驗(yàn)室使用； 苛刻的化學(xué)或者物理環(huán)境 |
吸光度標(biāo)準(zhǔn)品 | NIST可追溯標(biāo)準(zhǔn)品； UV (200-450 nm) ； 可見(jiàn) (400-900 nm) | 質(zhì)量控制； 對(duì)吸光度要求很高的應(yīng)用環(huán)境 |
Maya2000 Pro | 適用于紫外吸光度測(cè)量的高分辨率光譜儀。使用#H7號(hào)光柵，波長(zhǎng)檢測(cè)范圍200-300nm，5µm狹縫，CCD增加聚光棱鏡以增加靈敏度 |
D-2000 | 氘燈 (~215-400nm) |
CUV-UV-10 | 10cm光程比色皿和支架 |
CV-Q-100 | 圓柱形石英比色皿（帶Teflon封口蓋），體積28.2mL |
QP455-025-XSR-BX | 抗紫外老化光纖，芯徑455µm，長(zhǎng)度0.25m |
OceanView | 光譜儀操作軟件 |
Flame-S-UV-VIS | 模塊化光譜儀，光譜范圍覆蓋200-850nm，狹縫25µm，消二級(jí)衍射濾光片 |
DH-2000-BAL | 平衡氘燈和鹵素?zé)艄鈴?qiáng)的光源，波長(zhǎng)范圍215-2000nm |
CUV-UV | 1cm光程比色皿支架 |
CV-Q-10 | 10cm光程石英比色皿 |
QP450-2-XSR | 抗紫外老化光纖，芯徑450µm，長(zhǎng)度2m |
吸光度標(biāo)準(zhǔn)品 | NIST可追溯標(biāo)準(zhǔn)品； |
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